自新型冠狀病毒發現以來,特別是PCR實驗室新型冠狀病毒核酸檢測工作任務艱巨。先介紹一下PCR檢測的流程:
1試劑制備區
功能:主要是作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備,試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其它區域。試劑原材料需貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。所需要的儀器設備:
天平(用于精確稱量各類試劑)→超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成)→移液器(準確量取特定體積溶液20-100ul)→純水(超純水18.2ΩM.CM)→藥品冷藏箱(短期保存 )→試劑低溫冰箱(可選2-8°、-20℃)→混勻儀(移取樣本前需要混勻)(推薦艾本森品牌:MixMax漩渦混勻儀)→消毒車(空間環境消毒)→滅菌鍋(實驗室物品、試劑、培養基消毒滅菌)→PH計(配置試劑是精確測量PH值)
2 樣本制備區
功能:臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時DNA的合成。所需要的儀器設備
生物安全柜(為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散)→樣本低溫冰箱(-20℃,-80℃保存樣本及DNA)→高速臺式冷凍離心機(用于收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉淀物,有些樣品由于在常溫下不太穩定,需要低溫環境)→恒溫金屬浴(用于DNA雜交過程中水浴控溫)(HtPot40恒溫金屬浴)→移液器(準確量取特定體積溶液)→紫外燈或者消毒車(空間環境消毒)→混勻儀(移取樣本前需要混勻)(推薦艾本森品牌:MixMax漩渦混勻儀)→超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成)→低溫搖床(用于大腸桿菌和酵母菌的振蕩培養)→磁力攪拌器(加速溶解固體內容物 )
3核酸擴增區
功能:主要是DNA擴增,已制備的DNA模板和合成的DNA和主反應混合液,制備成反應混合液等,也可以在本區域內進行。在PCR測定中,通常在擴增后須打開反應管。
基因擴增儀 (基因檢測DNA/RNA擴增)→熒光定量PCR儀(核酸定量分析)→核酸提取儀(樣品DNA/RNA提取)→移液器(準確量取特定體積溶液)→紫外燈或者消毒車 (空間環境消毒)→超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成 )→純水裝置(用于PCR,DNA測序需要超純水)
4產物分析區
功能:主要進行的操作為擴增片段的測定,如使用全自動封閉分析儀器檢測,需要儀器設備:
基因擴增儀 (基因檢測DNA/RNA擴增)→熒光定量PCR儀(核酸定量分析)→核酸提取儀(樣品DNA/RNA提取)→移液器(準確量取特定體積溶液)→紫外燈或者消毒車 (空間環境消毒)→超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成 )→純水裝置(用于PCR,DNA測序需要超純水
電泳儀(水平電泳用于核酸DNA/RNA檢測,垂直電泳用于蛋白檢測,轉印電泳用于將蛋白轉印到膜上做western檢測)→凝膠成像系統/紫外檢測儀(用于核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙酰胺的觀察和拍照,紫外分析儀用于染色后核酸瓊脂電泳膠觀察,不能連接電腦)→電爐(電泳瓊脂凝膠加熱融化)